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多指标临床检测白血病干细胞
2013-02-21 10:29

白血病是一种难治性的血液系统恶性肿瘤,目前国际上对白血病的诊断通用的方法是MICC诊断系统。我院以前尚未建立起此诊断系统,使得白血病的诊断不规范、不全面、不系统,严重影响了白血病的诊治水平。血液科在前期建立形态学、免疫学(白血病免疫分型)的基础上,从2008年起,进一步开展了白血病干细胞、白血病分子生物学、白血病细胞遗传学的检测,不仅填补了院内空白,而且在此基础上有所创新(国内外首先通过多指标临床检测白血病干细胞),不仅提高了经济效益,而且提高了我院的学术水平、有较好的社会效益。
该技术共分3部分:1.白血病干细胞(LSCs)检测,包括LSCs免疫表型CD34+CD38-CD96+ /CD34+CD38-CD123+、LSCs相关基因abcb1、bmi-1、hoxb4等基因);2.白血病分子生物学检测,包括白血病36种融合基因检测(如BCR/ABL,PML/RARα,AML1/ETO,CBFβ/MYH11等),白血病突变基因检测(JAK2-V617F);3.白血病细胞遗传学检测,包括染色体核型分析,FISH检测。

该技术分别采用1. 流式三色标记法检测LSCs免疫表型;2.定量Real-time PCR法检测LSCs相关基因;3.巢式RT-PCR方法检测白血病融合基因;4. R带核型分析检测染色体核型;以及5. 荧光显微镜-Fish工作站进行FISH检测。

我们应用流式细胞仪三色标记法,检测了这两种LSCs表面标志(CD34+CD38-CD96+和CD34+CD38-CD123+),并与白血病疗效和预后进行了分析,结果发现这两种标志均可作为白血病干细胞免疫表型的标记,以CD96更特异。白血病干细胞免疫表型表达阳性的患者尤其是CD96阳性者化疗缓解率低,生存时间短,可作为预后较差的指标。

应用本技术对LSCs相关基因(abcb1、bmi-1、hoxb4)检测表明:在急性白血病患者中表达增高,缓解后表达水平明显下降;综合分析多指标,表达水平越高者临床疗效越差,化疗缓解率越低,并可作为临床评估疗效和预后的指标。

应用本技术检测白血病融合基因,较好的对白血病进行了分型,同时有助于检测白血病的发展及复发情况。结合染色体核型以及FISH检测的结果,系统的建立了本院白血病患者的MICC诊断系统,同时对预后判断具有重要的意义。

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